压力蒸汽灭菌生物指示物检验方法

压力蒸汽灭菌生物指示物检验方法

1、范围

本标准规定了压力蒸汽灭菌生物指示物的检验方法。本标准适用于压力蒸汽灭菌生物指示物的检验。

2、规范性引用文件

下列文件对千本文件的应用是必不可少的。 凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用千本文 件。 凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB 18281.1 医疗保健产品灭菌生物指示物第1部分：通则 

GB/T 24628 医疗保健产品灭菌生物与化学指示物测试设备

消毒技术规范(2002年版）卫生部

3、术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

生物指示物biological indicator I BI 

对指定条件下的特定灭菌程序具有一定抗力，并装在内层包装中可供使用的染菌载体。

3.1载体carrier 

试验微生物的支持物。

3.2存活时间survival time;ST 

在规定的条件下暴露千杀菌因子，试验的生物指示物中微生物存活的最长时间。

3.3杀灭时间killing time; KT 

测定生物指示物抗力时，受试样本经杀菌因子作用后，全部无菌生长的最短作用时间。

3.4D值 D value 

在设定的暴露条件下，杀灭特定试验微生物总数的90％所需的时间。

3.5存活曲线survivor curve 

在固定的灭菌因子作用下，微生物的存活情况与暴露变化的关联曲线。

3.6生物指示物抗力测试仪 biological indicator evaluator resistometer 

产生限定条件下灭菌过程中物理化学变化规定组合，以测量抗力的专用设备。

4、检验指标与方法

4. 1 抗力

4. 1. 1 菌种

用于制作压力蒸汽灭菌生物指示物的菌株为嗜热脂肪杆菌芽抱(Geobacillusstearothermophilus ATCC7953或SSIK31)或被证明具有本标准所要求的同等性能的微生物。

4.1.2 菌量

回收菌量大于等于1Xl05 CFU/片或大于等千1Xl05 CFU/支，对于成品的指示物，载体回收的菌 量与说明书上的菌量误差在－50%～＋300％之间，悬液回收的菌量与说明书上的菌量误差在士35%。测定菌量时，应最少测试4个样本，具体检测方法参见附录A。

4.1.3 D值

测试抗力时应使用生物指示物抗力测试仪， 生物指示物抗力测试仪要求见GB/T 24628。在121 ·c

时，D值的要求：D值大千或等千1.5 min，对千成品的指示物，测试的D值应在说明书上的D值士20% 的范围内。 应至少使用下列2种方法进行测试：

a)存活曲线法测试D值，参见附录B1

b)部分阴性法测试D值，参见附录 c,

c)验证法测试D值，将a)或者b)测试出的D值和4.1.2的回收菌量的平均数带人式(1)和 式(2)，计算出ST值和KT值。参照附录D进行验证：

ST≥(1ogN_。-2)xD值

KT≤(1ogN_。+4)xD值

式中：

N。一一每批生物指示物的回收菌量的平均数。

4.1.4 存活时间与杀灭时间

在121℃时， ST值的要求： 大千或等千4.5 min;KT值的要求：小千或等千24min。
4.2 载体的要求

符合GB 1828 1.1的要求。

4.3 恢复培养基的要求

4.3.1 恢复培养基应满足下列要求：

a)使10CFU~100CFU的微生物恢复生长，

b)使损伤的微生物恢复生长；

c)经过压力蒸汽灭菌后不会产生抑制微生物生长的物质。

4.3.2 恢复培养基按以下方法检验：

每个样本的恢复培养基中，接种10 CFU~lOO CFU的嗜热脂肪杆菌芽抱(ATCC7953)，同时设置阴性对照和阳性对照，培养至规定时间后观察 有无嗜热脂肪杆菌芽抱生长（一般观察培养基的颜色变化）。 如果恢复培养基有菌生长，井且阴性对照无菌生长和阳性对照有菌生长，判断恢复培养液合格。

4.4 稳定性试验

取包装完好的同批次生物指示物放置于制造商建议的保存条件下，存放至标签和说明书规定的有效期限，取出再次进行评价，生物指示物应符合4.1、4.2和4.3的要求。