培养基的高压蒸汽灭菌

培养基的高压蒸汽灭菌
灭菌原理：水的沸点可随压力的增加而提高，当高压蒸汽灭菌锅中水煮沸时，因锅是密闭的，蒸汽不能溢出，而使压力增加，水的沸点和温度也随之增加。因此，高压蒸汽灭菌是利用高压蒸汽产生的高温，以及热蒸汽的穿透能力来达到灭菌的目的。一般在0.1Mpa（15lb/in2）的压力时，温度可达121℃只要维持15~20min，就可杀死一切微生物的营养体和它们的各种孢子。

    灭菌方法：

加水于灭菌器内到规定的水平面。
需灭菌的物品（分装在试管、三角烧瓶中的固、液体培养基），棉塞、硅胶泡沫塞等用防潮纸包好（防止锅内水汽把棉塞淋湿），放入灭菌锅内的套筒中。摆放要疏松，不可太挤，否则阻碍蒸汽流通，影响灭菌效果。
将灭菌锅盖的排气管插人套筒侧壁的凹槽内，关闭灭菌锅盖旋紧螺栓，切勿漏气。
打开放气阀，加热，热蒸汽上升，以排除锅内冷空气，排气约5~ l0min，关闭放气阀。
关闭放气阀后，整个灭菌锅成为密闭状态，而蒸汽又不断增多，这时压力和温度都上升，直至压力表指针达到所需压力时，开始计时，通过调节热源，维持此压力到所需时间。
灭菌完毕，待压力自然降至0时，打开放气阀，注意不能打开过早，否则突然降压致使培养基冲腾，使棉塞、硅胶泡沫塞沾污，甚至冲出容器以外。
打开灭菌锅盖，取出已灭菌的器皿及培养基。
灭菌锅用完后，将锅内剩余的水倒掉，以免日久腐蚀。
3.微生物的分离与纯化

    借助于划线将混杂的细菌材料逐步稀释，最后在琼脂平板上分散开来，使之出现单一菌落而达到分离纯化的目的。

4. 注意事项

    1.要严格按配方配制。

    2.调pH不要过头。

    3.高压灭菌要注意物品不要过多，加热后排除冷空气，到时降压回零取物。

    4. 划线法分离纯化微生物注意各区勿相互交叉。

5. 示教内容：

    微生物的分离纯化